PCR中文翻译为聚合酶链式反应。自1985年PCR技术发明以来,技术发展已非常成熟了,PCR仪主要可以划分为三类,即:常规PCR仪、实时荧光定量PCR仪、数字PCR仪。
我们今天主要讲实时荧光PCR仪PCR技术在近30年的不断发展创新中,最受瞩目的当属荧光实时定量PCR技术(real-time quantitative PCR,或qPCR)。定量PCR技术真正实现了PCR从定性到定量的飞跃,通过对PCR过程的实时监控,专一、灵敏快速、可重复地精确定量起始模板浓度,已经在科研和临床诊断领域得到了越来越广泛的应用。
PCR的工作原理是变性、退火、延伸三个步骤。而对于实时荧光PCR仪的工作原理展开来讲就是:
将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后,完成高温变性、低温复性、适温延伸的热循环,并遵守聚合酶链反应规律,与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断,荧光素游离于反应体系中,在特定光激发下发出荧光;随着循环次数的增加,被扩增的目的基因片段呈指数规律增长,通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度,求得Ct值(也就是,循环阈值,即:每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数),同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照,即可得出待测标本目的基因的拷贝数。
这么讲可能你还不能完全理解,那你可以这么去理解,一个实时荧光定量PCR仪,最关键的是两大系统,一个光电系统,一个温控系统。光电系统是用来进行光电信号收集和转换的,温控系统是用来维持核酸扩增所需对应温度条件的。
最后电脑自带软件系统会通过相关关系方程式换算出临床定量结果。关于实时荧光PCR仪的厂家主要如下:进口厂家有罗氏诊断、美国伯乐、美国ABI(ABI已经被赛默飞收购)。国产老牌厂家主要是:上海宏石、杭州博日、西安天隆。